——免疫组化/原位杂交/荧光原位杂交

　　前言：

　　免疫组化(免疫组织化学)技术是一种基于抗体-抗原反应的组织、细胞和亚细胞研究方法，可用于对蛋白质抗原进行亚细胞水平的精细定位，跟踪此类抗原在生理和病理状态下分布位置的改变，或与组织和细胞中其他蛋白质的分布进行比较。在设立严格对照组的前提下，通过数码照相和图象分析系统还可以做到定量分析。是免疫学、病理生理学和蛋白质研究的重要工具。

　　由于免疫组化涉及抗体选择、抗原抗体亲和力及稳定性评估、抗体直接和间接标记、细胞多重染色以及多种免疫染色等技术环节，要求在数天时间完成制片、切片、脱腊、固定、封片、标记、孵育、显色和复染等多步操作，以往同类研究存在不稳定、重复性差、预实验周期长和严重浪费(时间和试剂)的问题。

　　原位杂交是针对完整细胞或组织，用基因探针来细胞内的DNA及其表达中产物RNA的定位和多少的分子生物学技术。常常配合免疫组化，在组织染色背景下再增加一种颜色或黑色颗粒，使细胞呈现五颜六色的形态，并且有定量能力。也是目前国际上比较流行的研究手段。但在切片制备、处理和探针标记上，存在许多技术难点。

　　针对上述问题，我院中心实验室建立了稳定可靠的完整的免疫组化和原位杂交技术平台，提供给研究生和各个课题组使用。这种类似流水线的实验流程可在1~2周内掌握，短期处理大量标本，迅速完成课题。

　　1、 免疫组化

　　平台内容：免疫组化和图象分析

　　以下由中心实验室提供：(根据片子数量、种类和不同的显色收费)

　　仪器用具：

　　冰冻切片机

　　温箱

　　湿盒

　　染色缸

　　切片架

　　镊子等工具

　　低温冰箱

　　微波炉

　　冰箱

　　NIKON TE2000S型荧光显微镜(带数码照相和图象分析系统)

　　试剂：抗原修复液(为枸橼酸缓冲液)

　　封闭液(PBS+Tween—20)

　　清洗液(PBS)

　　脱腊用试剂及器皿(二甲苯，乙醇)

　　固定冰冻切片用的甲醇，丙酮

　　封片胶

　　盖玻片：防脱片剂(或多聚赖氨酸处理好的玻片)

　　II抗(如生物素标记II抗，avidine—HRP,FITC—II抗，AP—II抗，包括抗鼠，人，羊，兔)显色剂

　　以下要求自己带：

　　标本——组织块，或切好的腊片

　　OCT

　　载玻片

　　贮片盒

　　I抗，特殊要求的II抗(如显示荧光)

　　2、原位杂交

　　平台内容：免疫组化和图象分析

　　以下由中心实验室提供：(标记按次收费，操作按片收费)

　　仪器用具：同免疫组化

　　试剂：1.标记药盒：生物素标记

　　标记后处理(纯化或不纯化)

　　2.预处理液

　　蛋白酶K

　　杂交液(Denhardt, Formamide)

　　预杂交液(ss DNA,碳酸葡聚糖溶液)

　　洗液(SSC)

　　3.生物素显色剂(邦定公司)

　　4.DEPC水

　　5.无RNase玻片

　　以下要求自己带：

　　标本——切好的腊片或于-70℃保存的冰冻切片

　　探针：长度为300bp左右高度纯化之DNA片段或30~40个碱基的生物素或Digoxin标记的合成寡核苷酸(单链)，特殊标记(如Digoxin标记探针及Roche公司的Digoxin抗体)要自己带

　　联系人：许玉凤、张英;电话：2656、2752

　　欢迎前来使用!

　　中心实验室

　　2004、12