任何进入本室进行膜片钳实验的人员,必须经过本室专门人员培训合格认可后,经允许方可进行膜片钳放大器、拉制仪、切片机等仪器的操作。
在实验过程中,必须严格按照实验流程进行操作,不得擅自更改操作步骤,不许自行调改仪器设置,以免造成仪器毁损。
统一安排实验时间,使用仪器后作登记。
脑片制作流程:
一、 配制蔗糖溶液(0~4°C)和NaCl孵育液(室温,20~25°C)各1L。
二、 麻醉动物:爪蟾—MS-222,大鼠—乌拉坦。
三、 解剖动物,取脑组织。
四、 用丙酮浸泡刀片30 min。
五、 切片:根据不同的动物和组织选择不同的方案。
方案一:低熔点琼脂包埋组织后进行切片
方案二:普通琼脂作托进行切片
六、 蔗糖溶液中处理脑片40min。
七、 NaCl溶液中孵育脑片0.5~1h后可进行膜片钳实验。
脑片制作过程需全程通入95%O2+5%CO2混合气。
拉制仪操作流程:
采用两步法拉制玻璃微电极。
一、 打开电源POWER(-),预热10min。
二、 调节拉制参数。
第1步拉制参数:将左侧旋钮旋置NO.1 HEATER,再旋转右侧第一个旋钮NO.1 HEATER ADJ,调到所需参数。
第2步拉制参数:将左侧旋钮旋置NO.2 HEATER,再旋转右侧第二个旋钮NO.2 HEATER ADJ,调到所需参数。
调节参数过程的动作要迅速,持续时间不宜过长。
三、 将左侧旋钮置于STEP2位置。
四、 安装电极,将加热丝旋到上方,按START,完成第一步拉制。
五、 待加热丝完全变暗后,将加热丝旋下,按START,完成第二步拉制。
六、 重复步骤四、五,可拉制相同参数下的电极。
七、 关闭电源POWER(○)