目录：

　　上篇： 规章手续

　　1. 实验中心管理细则

　　2. 实验中心安全守则

　　3. 实验室生物安全防护的基本原则

　　4. 非生物类有害物操作防护和废弃物排放管理规定

　　5. 实验室事故的处理

　　6. 实验中心应急预案

　　7. 实验室轮值登记表

　　8. 学术讨论发言登记表

　　9. 细胞室轮值登记表

　　10. 不履行责任后的处罚和赔偿制度

　　11. 电镜室出入及在工作区活动的人员管理规定

　　12. 地下室守则和低温冰箱使用规定

　　13. P2实验室(EBV转化实验室)规定

　　14. 细胞培养室管理制度

　　15. 冷库管理规定和使用须知

　　16.

　　17. 免疫组化实验室安全守则

　　18. 膜片钳室管理规定

　　19. 在职研究生综合评分表

　　20. 实验中心登记和阅签表

　　下篇： 仪器操作

　　1、 P2实验室出入程序

　　2、 细胞培养室安全和操作守则

　　3、 免疫组化室使用注意事项及流程

　　4、 BD InfluxTM流式细胞分选仪

　　5、 BD分选式流式细胞仪

　　6、 Olympus激光共聚焦显微镜

　　7、 Leica激光显微切割仪

　　8、 小动物活体显像Xenogen IVIS Spectrum系统

　　9、 蛋白液相分析FLEXMAP 3D系统

　　10、 AB 7300型定量PCR仪

　　11、 AB 3130XL测序仪

　　12、 各种显微镜、荧光显微镜使

　　13、 各种离心机

　　14、 各种天平

　　15、 冷冻抽干机

　　16、 紫外分光光度计

　　17、 细胞超声粉碎机

　　18、 PCR仪

　　19、 电泳设备

　　20、 凝胶成像仪

　　21、 常规仪器设备电热恒温水浴锅、烤箱、高压锅、超净工作台、冰箱等

　　22、 测量仪器设备

　　23、 连续可调式移液器

　　北京大学第一医院实验中心管理细则

　　北京大学第一医院实验中心，即位于北大医院门诊部的科研楼，为全院科研人员、用品和设备最密集的实验场所。请所有在本中心工作的所有人员须有强烈的安全防范意识，严格遵守本则及以下各项管理条例。

　　(一)入驻：

　　1. 得到科研处批准，并在科研处缴纳场地费后，携带纸质版《北京大学第一医院科研楼科公共实验台面租用协议》和导师签字后的空白内部支票1张(培训服务费+罚金准备金)，到科研楼120房间办理入驻手续;

　　2. 填写3联登记表，持2联到财务处缴纳门卡押金(现金，个人)500元人民币，说明实验内容，领取相应权限的门卡、更衣柜、和实验单元钥匙;

　　3. 按规定接受培训。

　　(二)培训流程：

　　1. 安全教育等开学初系列课程

　　2. 仪器使用培训

　　3. 专业实验室使用培训

　　4. 实验室规章制度阅签(奉送小册子1本)

　　5. 系列培训费：300元/人次;专业实验室培训费500元/人次;仪器培训免费

　　(三)领钥匙，领租用小仪器包(可自备)

　　1. 更衣柜，一把

　　2. 自习台抽屉，两把

　　3. 实验台三联抽屉，一把

　　4. 租用小仪器包含：小电泳槽(水平/垂直型/转膜槽自选)1、小振荡器1、小加热块1、小电泳仪/小离心机/小水浴锅——三选一(相邻三台面配一套)，押空白支票一张(保证离开时有效)。仪器在使用期间由个人维护，离开交还

　　5. 交还时完好，不收租金;因老化、停电等外因损坏时，不收租金

　　(四)责任和义务

　　1. 参见规章制度小手册，需要领取门卡/钥匙前阅签：认可被告知并承诺

　　2. 值日表(日期自选，须承诺被安排值日当周在场)

　　3. 学术讨论发言表(日期自选)

　　4. 专业实验室节假日使用预约表

　　5. 节假日自愿值班登记表

　　(五)离开手续

　　1. 交还门卡、钥匙、完好的小仪器包

　　2. 按记录支付培训服务和仪器使用费(内部支票)

　　3. 无故损毁按规定赔偿，个人负担部分从押金中扣除

　　4. 在职研究生领取《实验室综合评分表》，实验中心主任根据所有带教老师评语打分

　　实验中心安全守则

　　实验中心是开放的实验场所，人员来自全院各科室和外院。在本中心的所有师生均务必具备强烈的安全防范意识并自觉严格遵守。不按本规定执行，初犯免罚。教育后再犯，依情节严重程度，分别予以罚款500元、停止本人使用本中心(禁用一段时间或取消门卡)、上报研究生院听候处理和取消导师所有学生直至禁止所在科室所有人使用的处罚。

　　1、 服从专业实验人员——中心实验室老师的指导，包括实验技能和安全防护，遵守各项管理规定并参加轮值。

　　2、 凡进入中心实验室工作、学习2周以上的人员必须参加中心实验室统一培训，2周以下须接受所进入的实验室指导教师的各别培训。除专业安全知识外，一般的消防和救生指导必不可少。

　　3、 本着以人为本的原则，所有人员必须清楚地知道安全出口位置，在实验室发生失火、爆炸或有害气体逸出时，应首先尽快离开出事场所，报警119，内线2250(总值班)或2340，2504(保卫处)。在没有把握灭火，且不危及自己安全的情况下尽快撤离是第一位的，必要时一层窗口也是通道。(附中心实验室一、二楼通道及出口)。在起火、冒烟最初阶段，火势不大、烟雾中无强烈有害气体时，在场人员有把握控制时，可利用各室中的消防专业石棉布、楼道中的灭火器(附位置图)或浸透水的毛巾、工作服覆盖等方法灭火，同时关掉电源、拔除插销。不要在未知火源时用水灭火!!有机溶剂和电路起火尤其如此。不明时呼叫附近人员帮助或报警求救。

　　4、 严格遵守各项实验和仪器操作规程，以免发生化学药品和电器引起的伤害。如无把握，随时咨询，中心实验室指导老师有责任随问随答。发现隐患或危险苗头，如冰箱中有机气体味道强烈或电器及连线上焦糊的痕迹，要及时报告任意一位指导老师并记住他(她)的姓名。

　　5、 严禁向下水道中转移倾倒有机试剂，严禁各种可能引起火灾的不良操作，如在有明火处和电器旁向酒精灯、试剂瓶转移试剂，向在容量不够的插座或接线板上使用大电流电器;在倾洒试剂、漏水到电器上时仍继续使用仪器等。

　　6、 在不慎被酸、碱、有毒试剂、有机试剂、大量EB、放射性核素等溅洒到身体表面，特别是眼、口处，首先要用大量自来水冲洗，然后迅速呼救并到急诊室处置。

　　7、 在被病人血、病变组织或仍有感染性的实验材料污染到身体表面或工作服时，要及时做消毒处理。

　　8、 在使用可能危及他人的电器如高压锅、实验材料如病毒、同位素和有毒试剂时，应预先通知中心实验室和在此环境工作的人员，并在操作的过程从始至终不离开现场。

　　9、 对有害实验废物的处理，要严格按照国家有关规定，并在中心实验室指导老师监督下完成。

　　10、 对易燃、易爆、麻醉、剧毒物品、严格领用登记。对易燃、易爆物品如需少量存储时，应避免阳光直射。

　　11、 可引起急性或慢性中毒的试剂，如苯、氯仿、汞、乙腈等，应在通风柜中使用。

　　12、 有机试剂不得放入冰箱存储，使用时应远离火源。

　　13、 实验室内不得使用电炉。

　　14、 实验室禁止吸烟。

　　实验室生物安全防护的基本原则

　　什么是生物危害?

　　l 从广义上：指有害或有潜在危害的生物因子对人、环境、生态和社会造成的危害或潜在危害。

　　l 而狭义上：指在微生物和生物医学实验室研究过程中对工作人员造成的危害和对环境造成的污染

　　生物危险标志

　　实验室生物安全防护综合三原则：

　　1.安全设备、个体防护装置和措施(一级防护);

　　2.实验室的特殊设计和建设要求(二级防护);

　　3.严格的管理制度和标准化的操作程序和规程。

　　三者缺一不可。

　　生物安全分级

　　• 一级生物安全防护水平(BSL-1)

　　• 二级生物安全防护水平(BSL-2)

　　• 三级生物安全防护水平(BSL-3)

　　• 四级生物安全防护水平(BSL-4)

　　一级防护

　　适用于对健康成年人已知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验

　　不需要特殊的一级和二级屏障、除需要洗手池外，依靠标准的微生物操作即可

　　二级生物安全防护

　　对人或环境具有中等潜在危害的微生物。如临床检验实验室

　　普通微生物实验室加上使用生物安全柜、高压灭菌锅、眼睛清洗站

　　生物安全柜

　　• 在处理可以通过气溶胶暴露途径传播的感染性因子时必需使用生物安全柜或离心机罩帽。

　　• 各种密闭容器

　　• 其它为了消除或减小暴露于有害生物材料设计的工程控制设施

　　• 个人保护项目：

　　例如手套、外套、长服、鞋套、长筒靴、口罩、面罩、安全眼镜、或防风镜等

　　二级防护屏障

　　从事传染性材料的诊断和研究的微生物实验室对人员和环境具有一定的危害

　　实验室工作区和公共通道的分开，消毒设备(如:高压灭菌器)和洗手装置的使用

　　三级生物安全防护(目前实验中心不涉及)

　　适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有预防传染的疫苗

　　l 在BSL- 2 安全设备的基础上，加II级或III级生物安全柜操作、呼吸道保护、隔离建筑物或隔离区

　　l 双门进入系统

　　l 向内定向气流

　　l 单一通过气门

　　l 独立的送风排气系统

　　l 保持一定的负压梯度

　　l 密封产生气溶胶的设备。

　　l 实验室房屋要密封防滲漏。

　　l 墙、地板和天花板要防水，易清洁

　　四级生物安全防护(目前实验中心不涉及)

　　适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及其毒素

　　进行烈性传染病研究的实验室

　　与上述情况类似的不明微生物，也必须在四级生物安全防护实验室中进行

　　实验室生物安全防护必备的有关文件和记录：

　　实验微生物操作规程(每种一份);

　　紧急情况处理规程;

　　设施维护记录/年检(含工作人员签字)表;

　　实验室内仪器登记表

　　工作人员培训记录;

　　工作人员体检(含血清检查)和免疫接种登记表

　　实验室使用登记本(工作日志)

　　紧急情况登记和处理记录本

　　非生物类有害物操作防护和废弃物排放管理规定

　　非生物类有害物包括有害化学品、降解后产物有害的生物大分子和死细胞。细胞、组织和完整活体和涉及生物安全的无细胞物质须参照相关生物安全规章执行。实验中心是开放的实验场所，人员密集。在本中心的所有师生均应自觉严格遵守。不按本规定执行，初犯免罚。教育后再犯，依情节严重程度，分别予以罚款500元、停止本人使用本中心(禁用一段时间或取消门卡)、上报研究生院听候处理和取消导师所有学生直至禁止所在科室所有人使用的处罚。

　　一、 固体类：包括原始固态毒麻药品、爆炸物、易燃物、氧化剂和致癌物;未溶解的表面活性剂和染料

　　1、 毒麻药品如各种氰化物、生物毒素和砷化物;爆炸物如高氯酸、氯酸钾和二亚硝基苯;易燃固体红磷、硫磺和黄磷;氧化剂如氯酸铵和高锰酸钾等;那些性质不稳定、易发生巨变、能与水剧烈反应或有爆炸可能性的化学物或亚硫酸盐废物，及能产生毒气、蒸气或烟的废物如碱性金属、固体苦味酸，它们的购置、贮存、使用、入出登记和排放，须一次一报、专人专地管理，由实验中心统一安排

　　2、 干粉状表面活性剂如SDS、聚乙二醇、丙烯酰胺等易造成吸入性损害，须在通风橱内操作，包装和残留须用水溶解、冲洗或浸泡后按有害医学垃圾处理

　　3、 溴乙锭(EB)、碘化丙啶(DAPI)和偶氮等荧光染料有强烈致癌威胁，应尽量避免使用，用SYBRGREEN替代。自己配制时(科研楼总库可以领到配好的EB)要特别当心，防溅出和吸入。排放见下节。

　　4、 锐利物(Sharps)：能够造成刺透或撕破的废物。此类废物包括针、刀、玻璃或塑料碎片，须放置在硬的锐利物专用盒，专人回收

　　5、 死动物、组织、细胞沉淀、固体培养基和半固体培养基须包装严密后高压灭菌后按有害医学垃圾处理

　　二、 液体类：包括有机物、腐蚀性液体、有害溶液和液体培养基

　　1、 除了低浓度乙醇外的有机液体操作须在通风橱内进行

　　2、 冰箱内不得存储任何高闪点和没有双层密封的低闪点有机物

　　3、 腐蚀性液体如硫酸、盐酸、磷酸、氢氧化铵、含硫化合物等液体操作须在有下水的通风橱、戴好防护具、有带教老师指导下进行

　　4、 含EB、DAPI等有害致癌物和亚硫酸盐溶液的电泳液、转膜液和废弃试剂，须排放到专用水槽的活性炭吸附筒内，定期由安全员收集，严密包装后按有害医学固体垃圾处理

　　5、 可以与水以任何比例互溶的和不产生挥发性气体的醇、醛和有机酸类(如乙醇、甲醇、甲醛、乙酸和草酸等)，在经过大量水稀释后可排放于下水道

　　6、 不溶于水、有腐蚀性、挥发性的和产生刺激气味的有机废液(如甲苯、二甲苯、苯酚和巯基乙醇)只允许从标准通风橱(每层2个，分别位于东、西区的东北角)下水中排放，且不允许用大量水冲洗。如不在此操作，须收集在有内盖的棕色玻璃瓶或专用蓝色废液桶中，严格密封后由安全员或指派的专人送往密闭储藏室存放。由保卫处专人联系统一外送处理

　　三、 气体类

　　1、 有机气体操作须在通风橱内进行

　　2、 产生苯蒸汽、硫化氢和含硫化物分解气体等操作须在通风橱内戴好防护具下进行

　　其它：因没有场地和人员资质，任何放射性物体不得进入科研楼

　　实验室事故的处理~

　　(1)创伤：伤处不能用手抚摸，也不能用水洗涤。若是玻璃创伤，应先把碎玻璃从伤处挑出。轻伤可涂以紫药水(或红汞、碘酒)，必要时撤些消炎粉或敷些消炎膏， 用绷带包扎。

　　(2)烫伤：不要用冷水洗涤伤处。伤处皮肤未破时，可涂擦饱和碳酸氢钠溶液或用碳酸氢钠粉调成糊状敷于伤处，也可抹獾油或烫伤膏;如果伤处皮肤己破，可涂些紫药水或1%高锰酸钾溶液。

　　(3)受酸腐蚀致伤：先用大量水冲洗，再用饱和碳酸氢钠溶液(或稀氨水、肥皂水)洗，最后再用水冲洗。如果酸液溅入眼内，用大量水冲洗后，送校医院诊治。 (4)受碱腐蚀致伤：先用大量水冲洗，再用2%醋酸溶液或饱和硼酸溶液洗，最后再用水冲洗。如果碱溅入眼中，用硼酸溶液洗。

　　(5)受溴腐蚀致伤：用苯或甘油洗濯伤口，再用水洗。

　　(6)受磷灼伤：用1%硝酸银，5%硫酸铜或浓高锰酸钾溶液洗濯伤口，然后包扎。

　　(7)吸入刺激性或有毒气体：吸入氯气、氯化氢气体时，可吸入少量酒精和乙醚的混合蒸气使之解毒。吸入硫化氢或一氧化碳气体而感不适时，应立即到室外呼吸新鲜空气。但应注意氯气、溴中毒不可进行人工呼吸，一氧化碳中毒不可施用兴奋剂。

　　(8)毒物进入口内：将5—10m1稀硫酸铜溶液加入一杯温水中，内服后，用手指伸入咽喉部，促使呕吐，吐出毒物，然后立即送医院。

　　(9)触电：首先切断电源，然后在必要时进行人工呼吸。2A)%

　　(10) 起火：起火后，要立即一面灭火，一面防止火势蔓延(如采取切断电源，移走易燃药品等措施)。灭火的方法要针对起因选用合适的方法。一殷的小火可用湿布、石棉布火砂子覆盖燃烧物，即可灭火。火势大时可用泡沫灭火器。但电器设备所引起的火灾，只能使用二氧化碳或四氯化碳灭火器灭火，不能使用泡沫灭火器，以免触电。实验人员衣服着火时，切勿惊慌乱跑，赶快脱下衣服，或用石棉布覆盖着火处。Ea 关

　　(11) 伤势较重者，应立即送医院急诊室。]

　　实验中心应急预案

　　一、安全要求

　　实验室突发安全事件的分级如下：

　　1级：实验室失火、爆炸，造成人员伤亡

　　2级：毒麻药品流失，高浓度放射性同位素流失

　　3级：实验室有害气体、液体、固体逸散造成环境损害

　　应对实验室突发安全事件的标准如下：

　　1. 从事实验室工作的人的个人标准：参加过消防培训，知道报警程序和电话，明白应急出口位置，了解灭火器的基本使用程序。

　　2. 实验室安全员的工作标准：参加逐期消防培训;熟知紧急情况下的处理程序，熟知报警程序，会做各种伤害的急救，熟练使用各种消防器材，负责完成每周一次的安全检查。

　　3. 实验室主任或主管的工作标准：熟知全室的安全隐患并及时上报或自行解决，能够在紧急情况发生时做出及时的现场处置、报告上级和指挥疏散，监督每周一次的安全检查。

　　4. 实验室所属科室主任的工作标准：了解本科实验室的安全隐患并负责监督解决，在紧急情况发生时及时赶到现场协调救援工作，负责提供预案所需物资和设施。

　　5. 科研处处长的工作标准：制定应急预案并监督其中各项内容的落实情况，在紧急情况发生时负责组织和实施应急预案、协调院内各部门之间的配合和组织现场指挥、调度和外情专家，检查每周一次的安全报告并协助解决其中所反映的问题。

　　6. 主管院长的工作标准：负责决定是否启动本应急预案，制定针对实验室隐患的宏观安全措施，在紧急情况发生后向上级部门或媒体通告

　　一、 突发事件发生后的工作顺序

　　一、 突发事件发生后的报告程序

　　电话报告程序：

　　见表 北京大学第一医院科研机构(要加上实验室负责人手机或家庭电话)

　　到达时间要求：

　　事发现场→科研处：10分钟

　　科研处→主管院长：5分钟

　　主管院长→召集应急领导小组成员：5分钟

　　启动科研系统应急预案：20分钟

　　实验室负责人、科室领导和应急领导小组成员→到达现场：30分钟

　　应急领导小组→通知保卫处、物业公司等有关部门：40分钟

　　现场处理→事故通报：3天

　　二、 应付突发事件必要的物资、设施准备情况

　　科研楼全楼配备了消防喷淋报警中控系统、安全监视器、灭火器、应急灯和逃生指示路标。各主要实验室内配有护目镜、急救箱、防毒面具和石棉毯。

　　各实验区轮值制度(学术活动、安全、卫生、实验准备等)

　　实验中心开放实验室每层有东西2区，分别有带教老师负责管理，包括排值日，即轮值(Rota)。进入实验中心的所有研究生、技术员和其他实验室工作者，必须遵从该负责老师的安排参加轮值，职责包括安全监督、室内卫生、实验准备(如仪器维护、补充液氮和CO2等)。

　　轮值内容：

　　1. 超纯水仪前置去离子水，日检

　　2. 医学垃圾封口，贴标签，日检

　　3. 加热电器日检，注水(烤箱，水浴锅，PCR仪)，日检

　　4. 冰箱温度和结霜状态，周检

　　5. 细胞培养箱CO2气瓶检气，上报供应科氧气站，换瓶，连接;按需，不定时，至少每周二次观察

　　6. 细胞培养室安全柜或洁净台操作区、孵箱清洁消毒;每次操作结束后

　　7. 细胞培养室液氮罐加足液氮;按需，不定时，至少每周二次开盖探查

　　8. 检查仪器良好，污损等状态并记录;周检

　　负责老师负责监督检查本区轮值完成情况，每周2次或更多。

　　各区负责老师姓名和联系办法将会张贴在各区布告栏。

　　各室轮值职责由负责老师根据所在实验区内容负责制订、张贴、监督和上报。

　　轮值登记表

　　学术讨论发言登记表(每2周一次，周5下午1：30开始)

　　实验中心科研讨论内容：1、工作汇报;2、疑难讨论;3、方法探讨;4、经验介绍;5、文献报告;6、课题设计;7、新技术介绍;8、外请学术报告;9、公司和其他前沿技术宣介等

　　(日期自选，周期为X月一次)

　　细胞室轮值登记表

　　不履行责任后的处罚和赔偿制度

　　实验中心是开放的实验场所，人员来自全院各科室和外院。在本中心的所有师生均应自觉严格遵守。不按本规定执行，初犯免罚。教育后再犯，依情节严重程度，分别予以罚款500元、停止本人使用本中心(禁用一段时间或取消门卡)、上报研究生院听候处理和取消导师所有学生直至禁止所在科室所有人使用的处罚。

　　一、 使用本中心仪器设备出现故障及时报告负责人或办公室值班人，经核实属于正常损耗，非违规或野蛮操作情形不适用本制度。

　　二、 属于本人租用的小仪器包内的仪器，使用和保管不当造成全部或部分损失，应在交还时自动补齐。否则从支票中扣除相应费用。

　　三、 无故损坏公用仪器和耐用物品时需照价赔偿，向负责人交纳支票，拖欠不赔偿者停止本人及本科人员使用，待赔偿后方准重新使用。

　　四、 不完成轮值，造成本区同学/同事实验不便者，根据情节严重程度：

　　1、 口头警告，在通知的期限内加倍补做轮值;

　　2、 在规定期限内不补做轮值内容，取消其台面使用费的优惠;

　　3、 无视警告和处罚，通知导师，并暂时取消门卡，一月内停止本人使用中心台面和仪器;

　　4、 无视被取消的使用权，继续设法使用台面和仪器，通知研究生院和所在科室，永久停止本人及限制所在科室其他人员使用实验中心。

　　五、 违反操作规程、损坏公物及仪器设备者根据情节严重程度作如下处理。

　　1、 本人交书面检查，由所在科主任和导师签字后在实验中心备案。

　　2、 由研究生办公室和所在科室决定扣发本人月奖金的50-100%。

　　3、 限期修好仪器或按仪器原价扣除折旧(5%/年)赔偿(最低不得少于仪器原价的1/20)

　　4、 原则上赔偿由科室、导师、个人各负担1/3。

　　5、 根据损坏、修复情况及本人态度，实验中心有权决定是否向研究生院和学位办公室通报。

　　附 赔偿通知单

　　科：

　　贵科导师 的学生 于 年 月 日

　　损坏实验中心 仪器一台，价值 元。

　　按规定应赔偿 元(科室、导师、学生各负担1/3)。请于 月 日前给予解决。

　　实验中心

　　年 月 日

　　电镜室出入及在工作区活动的人员管理规定：

　　1、 来访者请先按门铃，获得允许后，需在缓冲区更换拖鞋

　　方可进入我室;

　　2、 禁止穿隔离衣、戴着工作手套者进入本室大门;

　　3、 禁止戴着工作手套者触摸门把手、按压门铃;

　　4、 进入我室的来访者或电镜使用者仅限于在其相关区域活

　　动，未经允许不得四处走动;

　　5、 未经允许不得操作和使用本室任何仪器设备;

　　6、 禁止在电镜机房拨打或接听手机;

　　7、在我室工作区域中行走时应脚步轻缓，严禁跑跳、敲打或撞击的行为;

　　8、禁止高声喧哗;

　　9、注意保持环境整洁，垃圾或废弃物应按分类放入相应的垃圾箱中;

　　10、离开我室的人员应将换下的拖鞋放归原处。

　　电镜科研工作的申请流程

　　1、申请人与我室科研或医疗的相关主管联系，商议和确定与电镜相关部分的实验工作;

　　2、 填写《北京大学第一医院电镜室科研工作登记表》

　　3、 上表由课题负责人或研究生导师签字确认后，连同需

　　交付实验费用的支票一起交到我室进行登记备案;

　　4、 申请人需在我室对其课题申请进行登记备案后方能送

　　交样品到我室开始实验;

　　5、 我室的联系电话：83575336或83572483

　　地下室管理规定

　　科研楼地下室为新设的实验区，包括P2实验室、细胞培养室4间、细胞准备室、大型离心机和去离子水制备室等。低温冰箱区有东西两个，面向全院开放。不对外开放的还有配电间、污水泵房和消防泵房。由于地下室封闭性强，防火和实验安全要求高，特做出以下规定。望大家严格遵守并互相监督。

　　一、 安全守则：

　　1、 凡在地下室进行实验的人员必须熟悉地下室安全出口，学会各种消防器材的使用方法，知道消防箱、报警电话和电铃的位置和使用方法。遇到危险的处理程序见科研楼一层张贴的中心实验室安全守则。

　　2、 地下室东西出口大门均为安全门，具有防火防盗双重功能：由外入内需要钥匙开启和关闭，由内出外只需旋转把手即可。此外，出口标志分断电指示灯和近地荧光路标，紧急情况下还可利用消防泵房窗外的安全梯。

　　3、 配电动力间和消防泵房是机房放重地，非维护人员勿入。如果发现电力和动力装置有异常，及时报告维修部门(电话2568)、后勤总值班(2250)或中心实验室(2656)。

　　4、 CO2气瓶和液氮罐按要求放置在地下室通风处，如公用走廊，闲人勿动!

　　5、 地下室的废水是由机房下水井的潜水泵抽提到一层排放，请务必不要向下水道乱扔杂物以免水泵堵塞。并随手关水，避免跑水。

　　二、 出入室手续

　　1、 进入地下室占用实验空间的人员，与租用其他中心实验室台面一样，按规定统一办理入室手续，包括管理制度签阅、交2张内部支票(1张固定额;1张空白)、交衣柜押金和领钥匙等。

　　2、 离开时结帐(包括损坏赔偿)、交钥匙，中心实验室主任在出室鉴定表签字盖章。

　　三、 开放时间、

　　1、 周一~周日早8：00~下午5：00开放大门和全部实验室，请遵守科研楼作息规定。

　　2、 地下室绝不允许过夜。周一~五下午5：00~11：00和周末做实验和自习人员务必在传达室登记，由门卫开、关大门。

　　低温冰箱区

　　一、租用场地放置冰箱：

　　1. 凡有意在本区存放低温冰箱的单位，需向科研处提出申请，经批准后方可进入。

　　2. 冰箱管理、运行状态等均由冰箱拥有者负责。

　　3. 放置冰箱的科室须遵守实验中心的规章制度。按年度提前交纳场地使用费。

　　二、租用中心实验室贮存盒：

　　1. 保持实验室的清洁卫生，及时清理遗洒的冰水、试管、手套等杂物。

　　2凡有意在中心实验室低温冰箱存放物品的人员需向中心实

　　验室提出申请，保证遵守规定，经同意后办理手续方可

　　放入。

　　3按年度提前交纳低温冰箱的使用费。增加标本盒数量时及时登记。

　　4. 按分配位置领取标准贮存盒，统一编号，存放标本，不得随意翻动他人的标本。

　　5. 实验结束后及时清理冰箱内物品、按时撤出。

　　P2实验室(EBV转化实验室)规定

　　P2实验室设有缓冲间，与普通环境隔开，所有操作均在生物安全柜内进行。实验人员必须在经过进出程序、操作安全和防护培训，经主任考核后，方可进入实验室。

　　1. 凡进入P2实验室的人员必须经过中心实验室专家论证，主任批准，到办公室登记后方可进入。

　　2. 正式开展实验前要经过培训、培训合格可单独开展工作。

　　3. 禁止未成年人进入实验室。

　　4. 禁止在实验室处理无关物品。

　　5. 禁止干扰正在操作或辅佐人员的工作。

　　6. 临时有病、皮肤破损或正在使用免疫抑制剂的人员不可进入实验室工作。

　　7. 在实验室，工作人员必须明确进入和离开实验室的程序，按张贴的规范操作，出入要登记。

　　8. 所有实验用品不可乱放，需经传递窗出入，必须经过浸泡消毒剂后，才可进行洗刷处理。固体废物须经过实验室内部高压消毒;液体废物需经消毒混合池混合过夜后才可排放。

　　9. 遵守实验室各项规定、爱护仪器、保持实验室的清洁，出现问题及时报告主管老师(电话：2656)或主任(电话：2044)。

　　10. 进入实验室的人员必须换拖鞋、穿隔离衣、带口罩、帽子以及消毒手套。

　　细胞培养室(位于地下室东区)管理制度

　　1. 本细胞培养室是净化级实验室，实验者必须遵从管理人员安排，严格按照分组规定使用超净台、培养箱、冰箱及显微镜等公用设施。

　　2. 细胞实验室内的设备由管理人员负责调整，不能擅自调整设备的各项设置，如遇到CO2培养箱报警或设置条件改变，或者其他仪器故障请及时通报管理人员。

　　3. 每天使用超净台必须提前30分钟打开超净台内的紫外灯消毒。

　　4. 超净台使用时请吹风，玻璃门与台面间应留有5-10厘米空隙以便空气流通，否则风机负载过重容易损坏。

　　5. 打开培养箱前，请先用酒精擦手。取细胞时注意观察培养箱是否正常，包括CO2、温度及水。如果出现问题及时与负责人联系。

　　6. 细胞传代前，仔细观察细胞的状态、密度，有无染菌情况，确保无菌后再进行操作;如染菌，必须立即用新洁尔灭浸泡。

　　7. 做实验前必须用75%酒精棉球擦手;操作完成后，应及时清理工作台，将各实验用具放回原处，如有溶液泄露，请用酒精棉球清理干净。实验完毕必须放下挡板，各种废弃物必须带出培养室。

　　8. 实验动物处理完毕后必须带出培养室，不得滞留，以免造成污染。

　　9. 室内常规用品不准随意拿出室外，所有物品不得挪作它用。未经实验者允许，不得翻看其他实验者的细胞。

　　10. 各人存放于冰箱内的培养液要注明姓名、配制日期，不得随便使用他人的培养液，以免交叉污染。严禁将与实验无关的易燃、易爆及其他有毒有害物品带入细胞室;在本细胞室内不得进行病原性微生物等其它易污染物的操作。

　　11. 节约用酒精、节约用电。注意防火防盗，杜绝一切可能导致火灾的行为。

　　12. 进入细胞室的实验人员必须遵守清洁卫生值日安排。

　　冷库(位于三四层西区)管理规定和使用须知(空白)

　　离心机室(位于地下室东区东北角)管理规定

　　本室为超速、高速及样品干燥仪器室。室内仪器均由中心实验室专门人员负责。

　　1使用者需遵守地下室管理规定，并经仪器使用培训及负责老师同意方可使用。

　　2使用中需遵守仪器使用规定及要求，注意用电、人身及仪器安全。

　　3按规定填写仪器使用记录并保持使用仪器的清洁。

　　中心实验室病理-免疫组化实验室安全守则

　　病理和免疫组化实验室现拥有先进的常规病理技术大型设备，包括：恒冷箱切片机、自动脱水机、石蜡切片机、包埋中心、图象分析系统。可开展经典病理学制片，特殊染色，免疫组织化学，原位杂交和其他分子病理技术。

　　1. 做实验必须经过中心实验室的同意，必须遵守中心实验室的一切规定。

　　2. 小心使用仪器，恒温箱及水浴锅高温不可无人看管或过夜使用，使用后进行登记。

　　3. 不能使用明火，以免引燃有机试剂。使用有毒害可挥发液体操作需在通风厨内进行。

　　4. 如果晚上做实验需要提前说明。

　　5. 最后离开时，必须关上机器、关上电源。

　　6. 保管好个人物品，一切自带物品丢失责任自负。

　　膜片钳室管理规定

　　仪器名称：膜片钳记录分析系统

　　主要设备：PC-2C放大器、AXON200B放大器、正置显微镜、NIR-DIC成像系统、水镜头、荧光显微镜、微操纵器、拉制仪、抛光仪、振动切片机等。

　　仪器应用范围：单细胞膜片钳记录(急性分离细胞、培养细胞)、脑片膜片钳记录(盲法、可视法)

　　⑴ 入室：签订《膜片钳技术平台合作协议》，一式两份。

　　⑵ 培训：包括理论培训和操作指导。膜片钳记录分析系统属于高端精密仪器，因此任何进入本室的人员，必须经过本室专门人员培训合格认可后，经允许方可进行独立操作。在实验过程中，必须严格按照实验流程进行操作，不得擅自更改操作步骤，不得自行调改仪器设置，以免造成仪器毁损。

　　⑶ 仪器损坏赔偿事宜按照中心实验室赔偿制度进行处理。

　　⑷ 统一安排实验时间，使用仪器后作登记，节假日使用预约表。

　　⑸ 实验人员负责当天的水电安全和室内卫生。

　　⑹ 其他事宜遵循《北京大学第一医院实验中心管理细则》

　　核酸扩增检测实验室(位于5层东侧分子诊断中心)化学试剂储存和使用、废弃物处理及生物防护程序

　　1.目的：保证实验室、实验人员和外部环境的安全。

　　2.适用范围：核酸扩增检测实验室常用化学试剂(75%酒精，5%次氯酸钠溶液)，实验室废弃物的处理;实验人员和外部环境的生物防护。

　　3.操作人：所有持证上岗人员

　　4.处理方法和步骤

　　4.1 化学试剂

　　4.1.1化学试剂的购买或领用

　　每月清点一次试剂，发现试剂存量不足时及时领用或提交请购申请。发现有试剂过期或明显变质时要立即报废，并将报废试剂妥善处理。

　　4.1.2化学试剂贮存

　　临床基因扩增实验室常用化学试剂均置于阴凉、干燥处保存。实验中常用到的一些化学试剂则根据要求保存于不同环境(如预冷75%乙醇保存于-20℃)。PCR试剂一律贮存于-20℃。

　　4.1.3化学试剂使用

　　临床基因扩增实验室常用化学试剂均无毒性或仅有低腐蚀性，故使用时主要应注意分类、分区保存、关注失效日期和使用后的及时清洁等。

　　4.2 废弃物处理

　　a)实验过程中的废液缸应装有5%次氯酸钠足量溶液，在实验完成后将废液缸中弃置物转入密闭垃圾袋中，并立即更换新5%次氯酸钠溶液。

　　b)做好实验室内各区的日常清洁工作。将所有用过的一次性物品，交医院统一按生物传染性制品处理。

　　c)扩增后的反应管严禁在实验室内打开，须包于一次性手套中，交医院统一按生物传染性制品处理。

　　4.3 .生物防护措施

　　生物防护的目的是在监控的基础上，对各种危险因素采取有效的控制措施，预防实验室中存在的污染源对实验室、实验人员和环境的污染。

　　4.3.1每天更换废液缸的消毒溶液(5%次氯酸钠溶液)，配置消毒液时，正确量取足量的消毒剂(用量杯，保证浓度)，水的用量也要正确，缸体密封性良好。

　　4.3.2 实验台面日常清洁时使用75%的酒精擦拭。

　　4.3.3 每区每次实验后紫外灯照射30～60分钟，如有需要可延长照射时间。

　　4.3.4 所有来自病人的血液或体液标本均应视作传染源，因此在标本的采集、运输过程中，标本容器应完好无泄漏。

　　4.3.5 处理标本时应穿工作服、戴手套，以免沾上皮肤。如手或其它部位的皮肤沾上血液或体液标本以及试剂，应立即冲洗干净。

　　4.3.6 有下列情况之一者，需另外消毒：手接触有传染性的微生物;水龙头、水池肥皂、工作服可能同时被大量细菌污染者。

　　4.3.7 在实验过程中，病人标本(血液、体液)或试剂不慎溅入眼内应立即用清水洗。

　　4.3.8 实验过程中在使用针具等锐器时，尽量小心防止受伤。若被锐器刺破时，应立即脱下手套，尽量挤压伤处，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要时进行预防补救措施。

　　4.3.9 在实验过程中病人标本外漏时，应立即用消毒液滴上，滤纸盖上半小时，然后用酒精擦洗，并经紫外灯消毒。

　　4.3.10 实验完毕离开时，应脱下所有该实验区个人防护装备。

　　4.3.11 实验完毕后应对实验室进行紫外消毒。

　　4.3.12 遇有意外事故应立即报告科室负责人，当事人应立即注射相关疫苗或进行预防性治疗，并进行医学观察，严重者应报告院技术负责人。

　　4.3.13要严格执行以上各项措施，并定期由科室负责人对以上措施的落实情况予

　　以调查。如调查不合格，对相应责任人进行处罚，限期改正。

　　总之，实验室的生物防护措施，从技术角度讲有三大环节：供应室的灭菌保证，实验室的生物防护措施、相应规章制度和实验人员的防护意识，实验废弃物的处理。在实施生物防护措施时，应严格遵守各种相关规定和制度，提高实验室整体生物防护水平。

　　在职研究生《实验室综合评分表》

　　根据研究生院对在职研究生转科评价的要求，本中心要求在离开时由指导老师填写在职研究生《实验室综合评分表》，中心实验室主任签字。

　　说明：

　　敬业精神和工作责任心10分(坚持真理，尊重科学，医德学风)

　　医疗作风与科学作风25分(造假或剽窃者，该项为“0”分)

　　团结协作与人际关系20分(不完成轮值者，该项为“0”分)

　　爱护公物和勤俭精神15分(超时间使用仪器，浪费试验耗材)

　　遵纪守法及劳动纪律20分(损坏仪器，违反操作规程和安全守则，他人投诉)

　　学术活动10分(不参加一次扣2分)

　　综合评定标准：

　　1. 优良：评定指标中至少获4项优，且无不合格;

　　2. 合格：评定指标中无不合格项;

　　3. 不合格：评定指标中有一项不合格。

　　实验中心进入登记和签字制度

　　实验中心要求所有进入实验中心一个月以上的研究生，包括科研型研究生和临床研究生，在进入实验室前参加统一培训(在每个学年的开始，没赶上者单独培训)，结束后阅读实验中心各项规章制度并在签字表签字认可。然后由实验中心统一分配指导教师、实验台、更衣柜和房间钥匙(为防止长期占用需交押金)。

　　进入前再次核实是否知道火灾报警电话和灭火器使用方法。

　　签字表内容包括姓名、科室、导师姓名、入室日期、本人联系电话/Email和签字人声明(见最后一页)。

　　实验室规章制度阅签表

　　签字人声明：

　　我已经阅读和理解了上述守则和规定，自愿执行并接受监督。我愿意为自己在中心实验室工作期间的行为负责。如有违犯，同意按规定接受处罚。

　　姓 名 科 室 导师 入室日期 结束日期 支票号 本人联系电话/Email 签名

　　免疫组化室使用注意事项及流程

　　标本处理注意事项：

　　新鲜组织应及时固定，一般推荐使用10%福尔马林固定6-24小时。切成不超过1.5╳1.5╳0.5cm3大小的组织块。根据特殊检查(特殊染色和组织化学染色、免疫组织化学染色和原位杂交)的需要，选择其它适宜的固定液进行固定。如果需要进行脱水、浸蜡程序请与负责老师联系。

　　包埋中心使用注意事项：

　　1. 需与负责老师预约好使用时间，并提前准备好组织块。

　　2. 实验耗材由实验室提供。

　　3. 使用结束后需清理干净石蜡残渣。

　　石蜡切片机使用注意事项：

　　1.使用前请提前预约。

　　2.自己准备中楷毛笔及干净镊子和载波片。

　　3. 使用结束后应清理干净所有残渣，锁好刀头。

　　冰冻切片机使用注意事项：

　　1. 使用冰冻切片机者应购买一次性刀片及借用金属圆托。

　　2. 自己准备好冻存的标本、OCT和涂有防脱片剂的载玻片。

　　3. 使用结束后应清理干净所有残渣，刀位调至中位处并锁好刀头，机器在一般情况下维持机箱温度在–10℃左右，不必关机。

　　图象分析系统使用注意事项：

　　1. 必须经过负责老师的同意方能使用显微镜，不能擅自使用。

　　2. 显微镜关机后如需使用必须间隔30分钟以上。

　　3. 因显微镜灯泡属消耗品，希望使用时节约时间，以增加灯泡寿命。

　　4. 不能使用移动硬盘和U盘，以免将病毒带入。采图后和负责老师联系刻录光盘。光盘5元/每张。

　　5. 望大家爱护仪器，小心使用。

　　免疫组化实验安全操作流程：

　　1. 冰冻切片保存于–70℃，用冰甲醇及丙酮各固定5分钟。石蜡切片用专用透明剂脱蜡，用乙醇及PBS洗后加入修复液，在微波炉或高压锅中修复抗原。

　　2. PBS洗片后用封闭液封闭一小时，用生物素标记的二抗者需先用H2O2阻断内源性过氧化物酶。

　　3. PBS洗标本后加入一抗在室温下作用一小时。

　　4. 用清洗液洗三次，每次5分钟。

　　5. 加入二抗，室温下作用一小时。

　　6. 在清洗液中洗三次，每次5分钟。

　　7. 若二抗为荧光抗体应在暗盒中操作及保存，然后用荧光显微镜照相。

　　8.若二抗为生物素标记，应该用链亲和素结合的辣根过氧化酶再作用一小时，然后清洗3次，每次5分钟，然后用DAB显色。若二抗为碱磷酶标记，则用NBT/BCIP显色。

　　9.显色后用苏木精复染，封片。